為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,PCR實驗室應采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。采用機械通風系統(tǒng)的實驗室緩沖區(qū)和核心工作區(qū)內的送風口和排風口的布置應符合定向氣流的原則,減少房間內的渦流和氣流死角,排風口應設在室內被污染風險最高的區(qū)域,單向布置,不得有障礙,宜采用上送下排方式。
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。
試劑準備區(qū)為正壓環(huán)境,壓力為5~10pa,可以保護試劑準備不受外界污染。
該區(qū)域主要進行的操作為標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。
標本制備區(qū)為負壓環(huán)境,壓力為-10pa,既可以保護人員不受有害氣溶膠感染,又可以保護樣本不受外界污染,還可以保護樣本之間不產生交叉感染。另外,由于在操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,應避免在本區(qū)內不必要的走動。
該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自標本制備區(qū)) 的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū)) 制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。
擴增區(qū)為負壓環(huán)境,壓力為-15pa。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源,應為負壓環(huán)境,壓力為-20pa,以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。